色譜柱的活化與維護(hù)

ninali

　　色譜柱作為高效液相色譜儀的主要部件，其性能直接影響到被測(cè)物質(zhì)的分離與測(cè)定效果。因此，色譜柱的活化與維護(hù)是確保分析結(jié)果準(zhǔn)確性、重復(fù)性及色譜柱長期穩(wěn)定運(yùn)行的重要環(huán)節(jié)。
　　一、色譜柱的活化目的
　　1、去除雜質(zhì)：活化能夠去除色譜柱內(nèi)殘留的溶劑、水分以及低沸點(diǎn)雜質(zhì)，這些雜質(zhì)可能影響后續(xù)分析的準(zhǔn)確性，導(dǎo)致峰形畸變、基線漂移。
　　2、提高惰性：通過活化，減少色譜柱對(duì)樣品組分的吸附或化學(xué)反應(yīng)的可能性，從而提高色譜柱的惰性，使得分析結(jié)果更加可靠。
　　3、增強(qiáng)熱穩(wěn)定性：對(duì)于氣相色譜而言，活化過程有助于提升固定液在高溫下的穩(wěn)定性和耐久性，有利于長期穩(wěn)定運(yùn)行。
　　4、恢復(fù)柱效：對(duì)于長時(shí)間未使用或經(jīng)過多次分析后性能下降的色譜柱，活化是恢復(fù)其初始分離效能的有效手段。
　　5、延長使用壽命：定期且正確的活化維護(hù)可以顯著延長色譜柱的使用壽命，降低因污染或性能衰退導(dǎo)致的頻繁更換成本。
　　二、色譜柱的活化步驟
　　1、反相色譜柱
　　初始沖洗：使用甲醇或乙腈（兩者都是常用的有機(jī)溶劑）沖洗色譜柱，沖洗體積通常是柱體積的20至30倍，以潤濕固定相，去除可能存在的污染物或殘余溶劑。
　　過渡沖洗：如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，需用與流動(dòng)相中鹽濃度相等比例的超純水和有機(jī)相（如甲醇或乙腈）進(jìn)行混合沖洗，沖洗量也是柱體積的20至30倍。這有助于平穩(wěn)地將柱子從純有機(jī)相轉(zhuǎn)移到含水的流動(dòng)相環(huán)境。
　　平衡：完成過渡沖洗后，繼續(xù)用最終的流動(dòng)相平衡色譜柱，直到壓力基線穩(wěn)定。如果基線不穩(wěn)定，應(yīng)延長平衡時(shí)間。
　　2、正相色譜柱
　　對(duì)于新的正向色譜柱，僅需要使用正己烷或異丙醇沖洗色譜柱，沖洗體積也是柱體積的20至30倍，最后按方法流動(dòng)相平衡色譜柱。
　　3、離子交換色譜柱
　　新柱先用甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積，然后轉(zhuǎn)換到適合的離子強(qiáng)度和pH值的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。
　　特殊功能化反相柱
　　如氨基柱、氰基柱等，如果原本保存在正相流動(dòng)相中，轉(zhuǎn)為反相使用時(shí)，需先用異丙醇或乙醇沖洗50-100個(gè)柱體積，以轉(zhuǎn)換其相態(tài)。
　　三、色譜柱的日常保存
　　反相柱：應(yīng)保存在甲醇或乙腈中。
　　正相柱：可保存在異丙醇或正己烷中。
　　離子交換柱：可保存在甲醇，或大于40%的有機(jī)相中，避免使用緩沖鹽保存。
　　四、色譜柱的清洗和再生
　　1、反相C18色譜柱
　　清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗。如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機(jī)相/水沖洗20個(gè)柱體積，然后再轉(zhuǎn)換到有機(jī)相沖洗20個(gè)柱體積。
　　再生：用水、甲醇、甲醇、水分別沖洗20個(gè)柱體積，在第一次用水時(shí)，進(jìn)樣5次200μL二氯亞砜DMSO。
　　2、正相色譜柱
　　清洗：每次清洗都用低流速起步，先用10柱體積不含添加劑的流動(dòng)相中的弱溶劑（如正己烷、氯仿）反沖色譜柱，再用20柱體積的強(qiáng)溶劑（如二氯甲烷或異丙醇）反沖色譜柱。
　　再生：用四氫呋喃、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷、正己烷分別沖洗20個(gè)柱體積。
　　3、離子色譜柱
　　清洗：用水沖洗30個(gè)柱體積去除鹽，然后用甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。
　　再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗，然后再用水洗、乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。

無藥可救

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